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RIPA組織/細胞裂解液

產(chǎn)品描述

規(guī)格：裂解液100ml，PMSF 1.5ml 本產(chǎn)品配有 PMSF（100mM）

保存：RIPA 裂解液 4℃保存，PMSF -20℃保存。

規(guī)格:裂解液100ml，PMSF 1ml 本產(chǎn)品配有 PMSF（100mM）

保存：RIPA 裂解液 4℃保存，PMSF -20℃保存

產(chǎn)品簡介:RIPA組織/細胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細胞膜(包括核膜)。本試劑提取的蛋白為可溶性

總蛋白.

使用說明:

如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀，請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。

根據(jù)使用量，取每Iml RIPA加入10ul PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，混勻備用(PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加).

1、樣品前處理:

a)對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔細胞量加入150-250

u裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。

b)對于懸浮細胞:離心收集細胞，按照6孔板每孔細胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，用手指輕

彈懸浮細胞以充分裂解。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成5-10x10細胞管，然

后再裂解.

c)對于組織樣品:把組織剪切成細小的碎片。按照每20mg組織加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液(如果

裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量).用玻璃勻

漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理:

將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Westem

blotting 和免疫沉淀等操作。

注意事項:

1、使用本裂解液可以裂解細胞核，釋放出核蛋白的同時，也會將基因組一并釋放出來，造成細胞裂解液粘稠.

此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液煮沸再離心，離心后直接上樣電泳;若想測定濃度，可入加少量SDS(1%),

煮沸后離心測濃度。

2、本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用Bradford蛋白濃度測定試劑盒，請選擇

BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度。

3、如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于

后續(xù)實驗。

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